Занятие 12: Влияния бактерицидных веществ на рост микроорганизмов


Бактериоцидность – способность физических, химических и биологических факторов убивать микроорганизмы. Из физических факторов наибольшей бактериоцидностью обладают тепловые и лучистые виды энергии. Химические вещества, обладающие бактерицидностью, называются бактерицидными веществами. Бактерицидность присуща и кровяной сыворотке человека и животных вследствие содержания в ней особого вещества – алексина, а также слезам, слюне, молоку, содержащим лизоцим, желудочному соку, в состав которого входит соляная кислота, и т. п. Бактерицидностью обладают вещества, выделяемые растениями – фитонциды, открытые Б.П. Токиным в 1928 г. Доказано, что фитонцидная активность присуща всему растительному миру. Одна из важнейших особенностей фитонцидов – специфичность их действия. Даже в микроскопических дозах они могут задерживать рост и размножение одних микроорганизмов, стимулировать рост других и играть существенную роль в регулировании состава микрофлоры воздуха, почвы и воды.


Лабораторная работа. Определение чувствительности микроорганизмов
к бактерицидным веществам методом бумажных дисков


Часть 1. Закладка опыта


Материалы и оборудование: луковицы лука, чеснока, корни хрена, горчица в порошке, 0,5–40 % формалин, хлорная известь, 3–5 % карболовая кислота, сорбиновая кислота и ее соли, антибиотики, пробирки со стерильным питательным агаром, стерильные чашки Петри, стерильная вода в пробирке, пробирки, культуры микроорганизмов.


Ход работы


1. Расплавить приготовленную питательную среду.

2. Приготовить растворы дезинфицирующих веществ в общепринятой концентрации.

3. В фарфоровой чашке натереть исследуемые части растений, богатых фитонцидами, приготовить кашицу из порошка горчицы, таблетки антибиотиков растереть и смешать с небольшим объемом воды.

4. В несколько чашек Петри по количеству вариантов опыта (таблица 7) вылить расплавленную питательную среду.

5. После застывания питательной среды исследуемую бактериальную культуру засевают газоном на питательный агар в чашке Петри. Для этого 1 мл взвеси микробов наносят на поверхность агара, осторожно растирают шпателем, излишки жидкости сливают.

6. На засеянную поверхность обожженным пинцетом помещают на одинаковом расстоянии друг от друга бумажные диски, пропитанные антибиотиками, фитонцидами или дезинфицирующими веществами (рисунок 46). Чашки помещают в термостат при температуре +25 ºС на 2–4 суток.


Часть 2. Анализ результатов опыта


Материалы и оборудование: чашки Петри с испытуемыми культурами и веществами, согласно количеству вариантов опыта, миллиметровая бумага, лупы.


Ход работы


1. Достать из термостата чашки Петри, сравнить количество и размеры колоний в опытном и контрольном вариантах. По диаметру зон задержки роста исследуемой культуры бактерий судят о ее чувствительности к тем или иным веществам.

Если испытуемое вещество обладает сильным бактерицидным действием, то в непосредственной близости от нанесенной капли рост бактерий не происходит и образуется стерильная зона (рисунок 46).

На некотором удалении располагается зона угнетения роста, для которой характерен рассеянный рост колоний.

2. При подведении итогов замеряют полоской миллиметровой бумаги размер (радиус) стерильной зоны и размер (радиус) зоны угнетения, данные заносят в свободную таблицу (таблица 7).


Рисунок 46 – Определение антимикробного действия антибиотиков (метод дисков):

1 – культура устойчива к антибиотику, содержащемуся в данном диске;

2, 3, 5 – культура чувствительна к антибиотикам; 4 – колонии устойчивых особей данного штамма; 6 – колонии антибиотико-зависимых клеток



Таблица 7 – Влияние бактерицидных веществ на рост микроорганизмов


Испытуемое вещество

(варианты опыта)

Степень бактерицидности

Размер зоны

«угнетения», мм

Размер зоны

отсутствия роста, мм

Контроль



Фитонциды (лука, чеснока, горчицы, хрена)



Дезинфицирующие вещества (40 % формалин, хлорная известь и др.)



Антибиотики

и т.д.




3. Сделать выводы о степени бактерицидного действия испытуемых веществ.