Лабораторная работа. Приготовление элективной натуральной жидкой питательной среды для выращивания Bacillus subtilis
Материалы и оборудование: сено, весы, ножницы, колбы объемом 100–200 мл, мел, электроплитки, ватные пробки.
Ход работы
1. Около 1 г сена из разнотравья мелко нарезать ножницами, поместить в коническую колбу объемом 100–200 мл, добавить около 50–100 мл воды, добавить щепотку мела и кипятить в течение 10–15 мин.
2. Колбу закрыть ватной пробкой и поместиь в термостат при температуре +25 ºС на 2–3 суток. На сене всегда имеются споры сенной палочки; при кипячении споры не гибнут и после остывания питательного субстрата дают начало вегетативным клеткам.
На поверхности сенного отвара образуется сероватая пленка, состоящая из особей Bacillus subtilis (сенной палочки).
Bacillus subtilis (семейство Bacillaceae) – аэроб, гетеротроф, сапрофит, обитает в почве, на поверхности растений, питаясь органическими веществами отмерших листьев. При иссушении субстрата образует споры, поэтому на поверхности сена всегда имеются споры сенной палочки. Сенная палочка грамположительная бактерия, подвижна, имеет перитрихиальное жгутикование. По мере старения культуры происходит деление клеток, в результате чего появляются цепочки клеток, как подвижные, так и неподвижные (рисунок 35).
![]() |
![]() |
Рисунок 35 – Bacillussubtilis |
Лабораторная работа. Получение элективной культуры Bacillus mesentericus на природной твердой питательной среде
Материалы и оборудование: неочищенные клубни картофеля, чашки Петри, скальпель, мел.
Ход работы
1. Промыть клубень картофеля и, не снимая кожуры, нарезать плоские ломтики. Их поверхность слегка натиреть мелом и положить в чашки Петри.
2. Выдержать чашки с ломтиками картофеля 10 мин. в сушильном шкафу, а затем поместить в термостат при
температуре +25–+30 ºС
на 2–3 суток.
На поверхности ломтиков картофеля образуется плотная морщинистая пленка, состоящая из особей Bacillus mesentericus (картофельной палочки).
Bacillus mesentericus (семейство Bacillaceae) – аэроб, гетеротроф, сапрофит, обитает на отмерших растительных остатках, в верхних слоях почвы. Бактерия подвижна, имеет многочисленные жгутики. При неблагоприятных условиях образует споры. Картофельная палочка синтезирует и выделяет наружу активную амилазу – фермент, расщепляющий крахмал до моносахаров (рисунок 36).
![]() |
![]() |
Рисунок 36 – Bacillusmesentericus |
Лабораторная работа. Приготовление синтетической накопительной питательной среды для свободноживущих азотфиксирующих бактерий
Почва является хорошей средой для обитания микроорганизмов в связи с наличием в ней питательных веществ и влаги. Почва хорошо защищает их от влияния прямого солнечного света, высушивания. Среди почвенных микроорганизмов встречаются азотфиксаторы – бактерии, которые в качестве источника азота используют молекулярный азот воздуха.
Материалы и оборудование: колба на 500 мл, колбы 100–150 мл, ватные пробки, весы, шпатели, плодородная почва.
Ход работы
1. Приготовить питательную среду.
Состав среды на 1 л дистиллированной воды: сахароза, глюкоза или маннит – 20 г; K2HPO4 – 0,2 г; MgSO4 – 0,2 г; NaCl – 0,2 г; K2SO4 – 0,1 г; CaCO3 – 5,0 г.
2. Питательную среду, не стерилизуя, разлить в колбы объемом 100–150 мл слоем 1–1,5 см и заразить парниковой почвой (0,5 чайной ложки).
3. Колбы закрыть ватными пробками и поместить в термостат при температуре 28–30 ºС.
Через 5–7 суток на поверхности питательной среды образуется коричнево-бурая пленка Azotobacter
chroococcum. Кроме того, жидкость в колбе пенится и издает запах масляной кислоты, что
указывает на развитие в нижней части питательной среды бактерий Clostridium pasteurianum
(лабораторная работа 10).
Azotobacter chroococcum (семейство Azotobacteraceae) – облигатный аэроб, гетеротроф. В молодой культуре содержатся палочковидные клетки, подвижные, размером 3–7 мкм. В старой культуре клетки кокковидные, соединены в пары и сарциноподобные пакеты. Клетки окружены слизистой капсулой и содержат много блестящих зерен волютина. При неблагоприятных условиях образуют цисты. При недостатке азота в среде азотобактер переходит к фиксации. Активность азотфиксации в культурах азотобактера составляет 15–20 мг азота на 1 г потребленного органического вещества (рисунок 37).
![]() |
![]() |
Рисунок 37 – Azotobacterchroococcum |