Занятие 9: Маслянокислое брожение


Лабораторная работа. Микроорганизмы маслянокислого брожения


Материалы и оборудование: большие пробирки, ватные пробки к ним, клубни картофеля, скальпели, мел, водяная баня, 5 %-й раствор хлорного железа.


Часть 1. Приготовление питательной среды для получения элективной культуры маслянокислых бактерий


Ход работы


1. Неочищенный картофель нарезать ломтиками, которые могут легко войти в пробирку. Заполнить ими пробирку на 1/3 объема, добавить
щепотку мела и заполняют водой почти до верха.

2. Пробирки поместить в водяную баню при температуре 80 ºС на 10–15 минут.

3. Пробирки закрыть пробками (для предотвращения доступа кислорода) и поставить в термостат с температурой 35 ºС. В этих условиях уже через 2–3 дня в жидкости можно обнаружить бактерии маслянокислого брожения.

Для преимущественного развития указанных бактерий созданы анаэробные условия, бесспоровые формы убиты предварительным нагреванием, добавка мела нейтрализует образующиеся кислоты и способствует развитию бактерий.


Часть 2. Микроскопическое исследование морфологии бактерий маслянокислого брожения


Ход работы


1. На предметное стекло нанести каплю культуральной жидкости, к
которой добавить каплю раствора Люголя. Маслянокислые бактерии содержат в своих клетках гранулезу, которая окрашивается раствором Люголя в синий цвет.

2. Микроскопировать раздавленную каплю с сухим объективом или с масляной иммерсией.

Clostridium pasteurianum (Clostridiaceae) – анаэроб, хемоорганотроф. Преобладает на слабо аэрированных почвах, затопляемых водой. Подвижные палочки с перитрихальным жгутикованием. Температурный оптимум находится в пределах 30–40 ºС. Образуют споры высоко устойчивые к неблагоприятным воздействиям, выдерживают кипячение в течение нескольких минут и погибают только при длительной стерилизации.

Рассмотреть микропрепарат и определить тип спорангия Clostridium pasteurianum с помощью рисунка 45.

3. С культуральной жидкостью провести качественную реакцию на масляную кислоту. Для этого к 5 мл жидкости добавить 2 мл 5 %-го хлорного железа. При нагревании образуется маслянокислое железо коричневого цвета.


Рисунок 45 – Clostridiumpasteurianum