Лабораторная работа. Количественный анализ микрофлоры воздуха
Воздух является неблагоприятной средой для жизни микроорганизмов. В нем они не находят пищи, подвергаются высушиванию, губительному действию прямых солнечных лучей, и поэтому большая часть их погибает. Состав микробов воздуха весьма разнообразен. Он зависит от степени загрязнения воздуха минеральными и органическими взвесями, температуры, осадков, характера местности, влажности и других факторов. Чем выше концентрация в воздухе пыли, дымов, копоти, тем больше микробов. Количество микробов в воздухе колеблется в больших диапазонах: от нескольких экземпляров до многих десятков тысяч в 1 м2. В лесу, особенно хвойном, микробов очень мало, на них оказывает губительное действие фитонциды растений. Для воздуха закрытых помещений санитарными показателями являются стафилококки, зеленящие стрептококки, а показателями прямой эпидемиологической опасности – гемолитические стрептококки и стафилококки.
Часть 1. Подготовка питательной среды и посуды
На первом занятии готовят и стерилизуют пробирки с питательной средой из питательного агара, стерилизуют сухим жаром чашки Петри.
Часть 2. Посев микрофлоры воздуха
Материалы и оборудование:водяная баня, аппарат Коха, спиртовки.
Ход работы
1. На водяной бане или аппарате Коха расплавляют в пробирках приготовленную ранее стерильную среду. Плавление питательного агара происходит при 100 ºС. Пробирки с жидкой средой охлаждают, чтобы было удобнее с ними работать (среда застывает при +60 ºС).
2. Расплавленный питательный агар выливают из пробирок в стерильные чашки Петри. При открывании пробирки ватную пробку берут за верхнюю часть, зажимая ее между двумя пальцами правой руки – мезинцем и безымянным, или между мезинцем и ладонью; вынимают пробку над пламенем спиртовки, а край пробирки слегка обжигают в пламени.
При разливе крышку чашки Петри открывают не полностью, а настолько, чтобы под нее вошло горлышко пробирки. Разлив производят на строго горизонтальной поверхности, чтобы агар распределился равномерно по дну чашки. С этой же целью сразу же после того, как агар выльют в чашку и закроют ее крышкой, чашку двигают по столу вращательными движениями.
3. После полного охлаждения чашки Петри и застывания среды производят посев микрофлоры воздуха. Для этого в избранном для анализа месте (возможные варианты опыта: учебная аудитория, коридор, туалет, гардероб, тротуар, двор и др.) чашки ставят на горизонтальную поверхность, снимают крышки ровно на 5 минут. Исследователь не должен находиться рядом с открытой чашкой. В течение 5 минут из воздуха на поверхность агара будут оседать микроорганизмы и споры. Очевидно, что чем загрязненнее микробами воздух, тем больше их осядет на поверхность агара.
4. Затем чашки Петри закрывают, восковым карандашом помечают варианты опыта, группу и фамилии студентов (на торце или верхней стороне чашки).
5. После посева чашки Петри переворачивают вверх дном, чтобы избежать возможного повреждения колоний микроорганизмов каплями конденсационной воды. Чашки помещают в термостат с температурой около +25 ºС для выращивания колоний микроорганизмов.
Часть 3. Анализ результатов опыта
Материалы и оборудование: фуксин, лупы, комплект для микроскопирования.
Ход работы
1. Подсчет количества колоний бактерий и грибов, выросших на поверхности агара в чашках Петри.
Колонии рассматривают через стекло чашки Петри. Просмотр колоний проводят сначала невооруженным глазом, а затем с помощью лупы со стороны дна чашки. При большом количестве колоний чашку Петри кладут на лист бумаги, на котором начерчено от 4 до восьми секторов и считают количество колоний в каждом секторе. Данные заносят в таблицу 4.
2. По формуле определяют количество микробов в 10 л воздуха. При этом учитывают, что, по приблизительным подсчетам, на площади 100 см2 в течение 5 минут оседает столько микроорганизмов, сколько их содержится в 10 литрах воздуха. Тогда количество микроорганизмов в 10 литрах можно рассчитать по формуле:
А = n · 100cм2 / S,
где А – количество микроорганизмов в 10 л воздуха, S – площадь чашки Петри в см², n – количество колоний в чашке Петри
|
Таблица 6 – Анализ микрофлоры воздуха
Варианты |
Количество колоний в чашке Петри в 0,01 м³
|
Количество колоний в 0,01 м³ |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
3. Изучение колоний в чашке Петри. Выявить число их типов, сравнивая колонки, выросшие на поверхности питательного агара, по следующим признакам: форма (округлая, овальная, чечевицеобразная, корневидная и др.); окраска; характер края (ровный, волнистый, лучистый, зубчатый); блеск (блестящая, матовая, просвечивающая); профиль приподнятости колоний над поверхностью среды (стелющаяся, плоская, выпуклая, вогнутая, складчатая, зернистая и т.д.); размер (точечная, мелкая, средняя, крупная).
4. Микроскопическое исследование выращенных колоний микроорганизмов. Для этого отбирают наиболее интересные колонии и готовят из них мазки, которые фиксируют и окрашивают фуксином. Рассматривают препараты на большом увеличении с объективом ×100 (с иммерсией).
Зарисовать выявленные формы бактерий.
В выводах объяснить различия в количественном составе микрофлоры мест исследования.