Лабораторная работа. Метод Грама
Материалы и оборудование: культуры Saccharomyces cerevisiae (дрожжи), Escherichia coli (кишечная палочка), Bacillus subtilis или Bacillus mesentericus, 0,1 % фуксин, генциановый фиолетовый, раствор Люголя, комплект оборудования для микроскопирования, 96 % этанол, полоски фильтровальной бумаги.
Ход работы
1. На предметное стекло нанести три капли воды, в одну добавить культуру дрожжей (грамположительную), в другую (в центре) – любую имеющуюся культуру микроба, в третью – культуру кишечной палочки (грамотрицательную).
2. Приготовить мазок, зафиксировать его. Мазки должны быть по возможности ровными и тонкими. При толстом мазке дифференциация его будет затруднена и грамотрицательные формы бактерий могут выглядеть грамположительными.
3. На мазки нанести полоски фильтровальной бумаги и на них
2–3 капли 1 %-го генцианового фиолетового на 2–3 минуты.
4. Снять фильтровальные бумажки, краситель смыть раствором Люголя и залить препараты этим же раствором. По истечении 1–2 минут препарат промывают водой.
5. На мазки нанести на 60 секунд 96 %-ый спирт. Дифференциацию мазка прекратить, когда закончится вымывание красителя из препарата, а затем быстро промыть водой.
На обесцвечивание мазка спиртом следует обратить особое внимание. При недостаточной обработке все клетки сохраняют окраску, при избыточной – обесцвечиваются.
6. Окрасить препарат на 0,1 %-м раствором фуксина в течение
1–2 минуты, промыть водой, просушить и микроскопировать объективом ×40 или ×90 (×100) (с иммерсией).
Грамположительные клетки окрашиваются в фиолетовый цвет, грамотрицательные – в розовый (рисунок 39).
Сделать вывод о грампринадлежности изучаемых культур.
![]() |
![]() |
![]() |
Saccharomyces cerevisiae |
Bacillus subtilis |
Escherichia coli |
Рисунок 39 – Результаты окраски бактерий по Граму |